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微米磁珠在磁分离分析上的应用
- 2019-08-06 -

  微米磁珠在磁分离分析上的应用
  
  微米磁珠用于磁分离分析,需将特定生物分子(主要是蛋白)牢固地(常选共价连接)固定在磁珠表面,以分离溶液中与被固定分子发生亲和作用的对应分子。考虑被固定蛋白和微米磁珠的成本,在磁珠表面固定生物分子量及被固定生物分子比活性就成为磁分离分析成本决定因素。
  
  在待固定蛋白和磁珠间插入长直链连接臂是提高固定蛋白比活性的关键措施。
  
  提高磁珠表面固定蛋白量需提高对低浓度蛋白偶联效率,这需吸附将蛋白到磁珠表面。在磁珠表面保留适度疏水性非特异吸附蛋白是提高低浓度蛋白偶联效率的通用策略。但磁珠表面非特异吸附会降低分离分析的特异性且因为本底信号高而使得检测限不满意;这类磁珠表面偶联蛋白处于疏水表面,这些偶联蛋白的热变性速度会比固定在亲水表面更快而缩短偶联蛋白的货架寿命。
  
  用于磁分离分析时,固定在磁珠表面的蛋白主要是天然抗体,其成本较高。基于天然抗体的特殊高级结构,我们设计了一种针对天然抗体的二硫键进行位点选择性共价连接固定化的方案,将稳定的二硫键修饰官能团通过长直链连接臂固定在pH 6.0所带净电荷为负的微米磁珠表面,就适合用于天然抗体的位点选择性固定化;其固定化天然抗体的比活性,比通过在pH 6.0所带净电荷为负的微米羧基磁羧基活化后所得偶联抗体提高超过50%。
  
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